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胚胎移植的发展史
发布时间:2003-10-28 11:45:15 来源:

  自从1890年Heape在英国剑桥大学首次报道获得兔子胚胎移植成功以来,胚胎移植技术已有100多年的研究历史。20世纪年代以且,胚胎移植的研究越来越多,对各种家畜均获成功,主要有绵羊(Warwick等,1934)、山羊(Warwick等,1949)、猪(Kvansnickii等,1951)、牛(Willett等,1951)马(Oguri等,1974)。1975年1月在美国科罗拉多州召开了第一届国际胚胎移植学会成立大会,标志着胚胎移植技术进入了打捞的更高的发展阶段。1976年牛的非手术移植技术推广,1977年开始商业化应用,13个国家成立了数百家商业化胚胎移植公司。仅北美洲1978年移植后妊娠的牛近1万例,错落有致85年达到一个新的水平万例,目前仅美国每年达30万例。胚胎移植和有关技术发展历史概括列于表1。
  在我国这一技术起步较晚,1973年家兔胚胎移植成功,1974年绵羊、1978年奶牛、1980年奶山羊胚胎移植成功;1976——1977年家兔胚胎和绵羊胚胎低温(10℃)保持1天和10天后移植成功;1980年绵羊胚胎超低温保存后,移植产羔;1982牛胚胎冷冻374天后移植产犊3头;1982年马胚胎移植成功。90年代前后分割牛羊成功,郭志勤等于1989年获得奶牛冻胚分割移植后产同卵双犊和平共处五项原则992年绵羊鲜胚分割四分胚移植产同卵羔;1989年牛四分胚成功产犊(表2)。
  表1 国外胚胎移植和有关技术发展史的概括
  作者事例动物
  Heape,1890Beidl等,1922Nicholas,1933Warwick和Berry,1949Kvansnickii,1951Willet等,1951Marden和Chang,1952Alberta家畜移植有限公司,1971Whittingham等,1972国际胚胎移植学会成立,1975Steptoe和Edwards,1978 首次胚胎移植成功胚胎移植成功胚胎移植成功胚胎移植成功胚胎移植成功胚胎移植成功首次胚胎州际运输(保存在10℃)首次成立家畜胚胎移植的商业公司经长期冷冻,胚胎发育产仔体外受精—胚胎移植,获得世界上第一例试管婴儿 家兔家兔大鼠绵羊和山羊猪牛家兔牛牛人
  表2 我国胚胎移植和有关技术发展史的概括
  作者(年代) 内容 家畜
  陈玉琦(1973)中国科学院遗传研究所(1974)中国科学院遗传研究所(1976)谭丽玲、郭志勤等(1976)广东协作组(1978)中国科学院遗传研究所(1979)王建辰等(1980)王运京、王秀阁等(1980)中国农业科学院畜牧研究所(1980)姚振沅、谭丽玲等(1982)马玉斌(1982)王光亚等(1987)张涌等(1987)谭丽玲、马世援等(1989)郭志勤等谭丽玲等(1989)郭志勤等(1992) 胚胎移植成功胚胎移植成功胚胎低温(10℃)保存产仔胚胎低温(10℃)保存产羔手术法胚胎移植成功–196℃保存胚胎产仔胚胎移植成功非手术法胚胎移植成功–196℃保存胚胎产羔–196℃保存胚胎产犊胚胎移植成功冷冻胚胎产羔胚胎分割移植成功鲜胚分割同卵双生产犊冻胚分割同卵双生产犊鲜胚分割四分胚产犊鲜胚分割四分胚产羔 兔绵羊兔绵羊奶牛兔奶山羊奶牛绵羊奶牛马奶山羊奶山羊奶牛奶牛奶牛绵羊
  (三)胚胎移植主要内容
  胚胎移植的主要内容包括:供体和受体母牛的选择,供体母牛的超数排卵,供体与受体母牛的同期发育,胚胎的回收,胚胎质量的鉴别,胚胎的冷冻保存,胚胎移植,受体的妊娠诊断等。
  1、供体牛的选择
  应选择品种优良、生产性能遗传性稳定、系谱清楚、体质健壮、繁殖机能正常、无遗传和传染性疾病、年龄在15月龄到处周岁以内的母牛作为供体为宜。
  2、供体牛的超数排卵
  超数排卵的方法较多,但目前较多采用促卵泡素(FSH)减量注射法进行处理,用两通路或三通路冲管通过直肠把握的非手术法进行冲卵。
  3、胚胎的回收
  主要包括:器械和冲卵液的准备,供体牛的保定和麻醉,冲卵管的插入,灌流回收卵,术后处理等环节。
  4、在显微镜下将胚胎检出后进行洗涤,根据胚胎形态及发育阶段将胚胎分为A、B、C级。
  5、胚胎的冷冻保存
  胚胎 的冷冻保存主要在三步平衡法和一步细管法,将胚胎装管后利用程控冷冻仪进行冷冻,冷冻后投入液氮容器进行保存。
  6、胚胎移植
  主要包括受体牛的准备,移植器械的准备,冷冻胚胎的解冻、移植。
  二、胚胎的获得
  胚胎原获得是胚胎工程的基础性和关键性工作,是进行胚胎移植(ET)及其研究工作的前提,目前胚胎的获得主要分体内胚胎的获得和体外胚胎的获得两种方式。体内胚胎的获得是通过超数排卵(MO)技术,从优秀的母牛(供体)体内采得胚胎(表3);体外胚胎的获得是通过胚胎工程技术在供体牛体外获得胚胎,主要有体外受精技术(IVF)、胚胎的分割、胚胎的克隆等手段(表4)。目前,胚胎的体外生产,主要的是体外受精技术,即通过IVF在体外将供体母牛的卵母细胞培养为优质的胚胎。体外受精技术已由研究转为商业化生产,它解决了超数排卵和胚胎分割所能获得胚胎数有限及胚胎克隆等方法仍处于实验室研究阶段的缺点,是解决大量胚胎来源的一条重要、有效的途径,是当前工厂化生产胚胎的主要手段。
  表3 体内胚胎获得的主要操作
  操作项目内容
  供体牛的选择超数排卵人工授精胚胎采集胚胎的室内操作 要求供体有数量和质量的保证利用FSH等促性腺激素和PGF2α处理,引起供体发育倍量优质精液授精,同时肌注促排药物(LRH-A3 )产生多个受精卵采用手术法或非手术法(子宫冲洗工艺)于输精后7天进行采集包括胚胎的镜检、评定和保存
  表4 体外受精的主要操作
  操作项目内容
  精子采集精子获得卵子采集卵子成熟体外受精受精卵体外培养 射出精子(冷冻精子)附睾精子交配母畜生殖道内在摘出的母畜生殖道内培养合成培养液内培养排卵卵子卵泡卵体内成熟 卵泡卵在合成培养液内培养成熟最适合成培养液内培养完成受精 异种或同种生殖道内培养合成培养液内培养
  (一)供体牛的选择和饲养管理
  1、供体牛的选择
  供体的选择是胚胎移植技术的一个重要环节。胚胎移植计划中对供体资源要进行调查,依据调查资料,运用各种科学方法做出综合评定,选出符合要求的个体。要求供体既要有数量又要有质量,应有重要育种价值,经过血统、生产性能和体型审查,选择经济性能优越、生殖机能正常、对超数排卵有良好反应的健康母体。选择绵首要条件提其遗传迷价值及生产性能、健康情况和繁殖品质,看其是否具备品种的体型外貌特征按照能反应经济性状的遗传能力的数据进行挑选工作。要求供体除经济价值外,还要有健康的体质和良好的繁殖状态,在生产性能、繁殖和使用年限上具有较高的遗传力,具有重要的育种价值。所以,确定供体前需作必要的检查,进行严格的选择。
  (1)供体牛选择的原则 当制定应用胚胎移植计划时,一定要慎重地选择好适合的供体牛,要求 健康无疾病、具有较高的育种价值和生殖机能处于较高的水平。技术和经济两方面考虑,可参考以下原则:①品种优良。符合本品种标准,血统、体型外貌和生产性能全优,具有早熟性和长寿性,且遗传性稳定、谱系清楚,无遗传缺陷。②体质健康。体质健壮、肢蹄强健、繁殖机能正常,无遗传病、传染病、难产、流产和繁殖障碍的经历,或很低的助产率。发情周期不明显的繁殖障碍牛、患子宫内膜炎或长期空怀母牛,都不能作为供体。③年龄适宜。在15月龄到8周岁以内为宜。④繁殖品质。具有较高的繁殖力,生殖器官正常,发情周期正常。从幼龄起发情周期就正常(或至少以前有过两次正常发情的)母牛,经产后60 天以上有两次正常发情记录;受胎性好,受胎率及配种指数较好,连续一年产一犊。⑤排卵成绩。母牛生殖器发育良好,尤其是卵巢、子宫的状态,对超数排卵要有良好的反应,且排卵数多,采得的受精卵质量良好。⑥性情温顺。选择性情温顺的母牛作为供体,以便于操作。
  预作为供体的母牛,最好有一次完整的生产记录(产犊、产奶),以衡量其种用价值后,才有可能作为供体选择的对象。以上标准只是一般性原则,根据实际情况可灵活运用,不可强求一律。

 

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